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Isolierung und IDENTIFIZIERUNG von Candida aus der Mundhöhle

abstrakt

Verschiedene Techniken zur verfügung Stehen für sterben Isolierung von Candida in der Mundhöhle. Solche Methoden spielen Eine Wichtige Rolle bei der Diagnose und treatment von oraler Candidose. Die Wachsende bedeutung der Candida Teilweise ist für Entstehung von HIV-Infektion und DM verstärkten Einsatz von immunsuppressiven Chemotherapie verwandt sterben. zusammen mit Candida albicans es hat Eine Größere anerkennung der bedeutung der nonalbicans gewesen Candida Spezies in der oralen Candidose. IDENTIFIZIERUNG der infizierenden Stämme Candida wichtig ist, da Isolat Candida Spezies Sind sehr Unterschiedlich, Sowohl in ihrer fähigkeit, Infektion und available in ihrer Anfälligkeit für Antimykotika verursachen. SOMIT bietet this Bewertung EINEN Überblick über sterben Zuverlässige Methoden der Candida-Isolierung und IDENTIFIZIERUNG von Isolaten aus der Mundhöhle.

1. Einleitung

der Begriff Candida stammt von DM lateinischen Wort offen, war means, weiß. Die Sporen von Candida Sind ein symbiotischer, Harmlos Formular dimorphen Pilz, invasive und pathogene Pseudohyphen Wird, WENN Eine Störung im Gleichgewicht der Flora oder in Entkräftung des wirtes ist [1] Eines.

Die Übersetzung of this endogenen commensal Auf die krankheitserregenden Parasiten can andere factors als sterben pathogenen Eigenschaften des organismus Selbst, das Ziemlich einzigartig ist in verbindung gebracht Werden, verglichen mit den Meisten other Infektionskrankheiten, Wobei sterben Virulenz der betrachteten Organismen der Schlüssel ist, Faktor in der Pathogenese . DAHER Candida ArTeN Sind streng opportunistisch. Es könnte mit, sterben Dass Weder oberflächliche noch systemischen Forme Informationen angegeben Werden von sterben Candida Infektionen könnten in Abwesenheit der zugrunde liegenden Pathologie eingeleitet Werden [2].

There is viele ArTeN von Candida (Tabelle 1), [3], Aber am häufigsten Eine sterben, sterben aus der Mundhöhle zurückgewonnen Wird, in symbiotischer Sowohl Zustand und in Gefallene von oralen Candidose ist C. albicans. Es wird geschätzt, that this Spezies für mehr als 80% aller oralen Hefe-Isolate ausmacht.

ArTeN Candida.

In den Letzten jahren verursacht hat es Durch Die opportunistischen Pathogen ein Erhöhtes Interesse in Infektionen Candida. Die Wachsende bedeutung der Candida Teilweise ist mit DM Auftreten von HIV-Infektion und DM verstärkten Einsatz von immunsuppressiven Chemotherapie [4 bezogen. 5]. IDENTIFIZIERUNG der infizierenden Stämme Candida wichtig ist, da Isolat Candida ArTeN unterscheiden Sich in ihrer fähigkeit, sehr Unterschiedlich, Sowohl Eine Infektion zu verursachen, [6] und Auch Fungizid Mittel in ihrer Anfälligkeit [7].

zusammen mit C. albicans es hat Eine Größere anerkennung der bedeutung der nicht-albicans gewesen Candida Spezies in der Menschlichen Krankheit. C. glabrata und C. krusei Sind ArTeN, sterben Aufmerksamkeit aufgrund ihrer erhöhten Resistenz gegen bestimmte Antipilzmittel erhalten HABEN. C. dubliniensis ein recently identifizierten pathogenen Spezies ist, erstmals im Jahr 1995 beschrieben, Wenn Es mit Wurde coisolated C. albicans von Gefallene von oralen Candidose bei HIV-infizierten Personen, [8].

Of this Aufsatz Gibt EINEN Überblick über sterben Zuverlässige Methoden der Candida-Isolierung und IDENTIFIZIERUNG von Isolaten aus der Mundhöhle.

2. Pathogene Attribut Candida

Der Übergang von Candida von Einems harmlosen commensal zu Einems pathogenen organismus ist komplex und Wird auf subtile Veränderungen der Umwelt im zusammenhang mit, sterben auf Expression Einer Reihe von Virulenzfaktoren (Tabelle 2) Führen sterben. Es ist sterben Kombinierte WIRKUNG Sowohl Gastgeber und Candida factors, sterben letztendlich zur Entwicklung von oralen Candidose Beiträgen [8].

Virulenz factors im zusammenhang mit Candida albicans.

Unabhängig von der Art von Candidosen, sterben fähigkeit von Candida ArTeN ein Schleimhautoberflächen von Gesunden Personen zu bestehen ist ein Wichtiger Faktor, um seine Virulenz beiträgt. Dies ist BESONDERS wichtig in der Mundhöhle, der Wobei organismus sterben Mechanischen Waschwirkung mit Einer Relativ- Konstanten Fluss von Speichel in RICHTUNG der Speiseröhre [9] zu Widerstehen.

Keine Einzigen vorherrschende Virulenzfaktor für Candida Erkannt Wird, obwohl es Eine Reihe von factors, sterben bei der Förderung des Infektionsprozesses Eine Rolle spielen. Dazu gehören Attribut, sterben an der Adhäsion von Candida zur oralen Oberflächen (zB relativ Zelloberflächenhydrophobie und der anwesenheit von spezifischen Adhäsin-Moleküle), sterben fähigkeit, Wirtsimmunabwehrmechanismen (beispielsweise Hochfrequenz phänotypischen Schalt und morphologischen Übergang), sterben und Freisetzung von hydrolytischen enzymen (beispielsweise sezerniert Aspartyl Proteinasen und Phospholipasen zu breiter), sterben Schaden auslösen can Zellen [8] zu bewirten.

3. Oral Candidose

Samaranayake [10] vorgeschlagen, Eine Klassifizierung, weh Orale Candidosen Läsionen in two Hauptgruppen unterteilt gerechnet wurden sterben: Gruppe I oder Primäre orale Candidosen auf Läsionen beschränkt lokalisiert in der Mundhöhle ohne Beteiligung der Haut oder Schleimhäuten other; Gruppe II oder secondary Orale Candidosen, weh Šich Läsionen in der Mund die sind Eulen extra- Seiten Wie Haut (Tabelle 3). Gruppe I Läsionen Bestehen aus der klassischen Triade&# X02014; pseudomembranösen, gerötete und hyperplastischen Varianten&# X02014, und einige Haben vorgeschlagen, weitere Unterteilung des letzteren in plaqueartige und knotige Typen [11].

Einstufung der oralen Candidose.

4. Diagnose von Oral Candidose

Sterben Diagnostizieren der oralen Candidose Kann oft Auf die Art der Klinischen präsentierende Eigenschaften Hergestellt Werden, mikrobiologische Proben sollten, WENN Möglich, um Torerfolg Getroffen Werden identifizieren und zu quantifizieren Jeder obwohl sterben Candida Dass vorhanden sein und Isolieren für antimykotische Empfindlichkeitsprüfung Bieten.

5. Elle Verfahren zur Isolierung

Techniken zur verfügung, sterben für Isolierung von Candida Mundhöhle gehören in der sterben verwendung Eines Abstrich, EINEN einfachen Abstrich [8], ein Abdruck Kultur [12], Sammeln von Voll Speichel [13], sterben Konzentrierte Mundspülung [14], und Schleimhautbiopsie. JEDE Methode hat bestimmte Vorteile und Nachteile, und sterben Auswahl der Sampling-Technik Wird in erster Linie Durch Die Art der Läsion Bestimmt untersucht Werden (Tabelle 4). Wo Eine leicht zugängliche und definierte Läsion ersichtlich ist, Wird Eine Direkte Stichprobenverfahren, Wie beispielsweise verwendung von Einems Tupfer oder Einems sterben Aufdruck oft bevorzugt, da stirbt Wird Sich an der Läsion Informationen der gegenwärtigen Organismen Bieten. In Gefallene in Denen es keine offensichtlichen Läsionen oder in Gefallenen, Wo die Läsion ist schwer zugänglich, Eine indirekte Sonde basierend auf Kultivierung Speichelproben oder Eine Mundspülung ist mehr akzeptabel.

Elle Verfahren zur Rückgewinnung von Candida aus der Mundhöhle.

Quantitative Abschätzung der Pilzbelastung Kann mit Aufdrucken, Konzentrierte Mundspülung und sterben Kultivierung von Mundspülung, als Mittel zur Differenzierung Erfolgen between commensal Wagen und pathogene Existenz der mündlichen Candida. mit Bildenden höheren Belastungen wahrscheinlich im letzteren betrachtet [8].

6. Direkte Mikroskopie

Morphologische Merkmale Candida Spezies [15] (Tabelle 5) Müssen für sterben Identifikation zu prüfen. Ein Abstrich ist der Wert bei der Differenzierung between Hefe und Hyphen Forme Aber ist Weniger empfindlich als kulturelle Methoden [16]. Kaliumhydroxid (KOH) Vorbereitung der Probe zeigt nichtpigmentierten septiert Hyphen mit charakteristischen dichotomous Verzweigung (in Einem Winkel von ETWA 45&# X000b0;) [17]. In KOH-Calcofluor Fluoreszenz Fleck Methode Pilz-Eigenschaften Wie Hyphen, Hefezellen und andere Pilzelemente fluoreszieren [18].

Morphologische Merkmale Candida Spezies.

Ein Abstrich von der läsionaler Webseite Genommen IST fest auf auf Objektträger und Dann Entweder Durch das Gram-Färbung oder Durch Die periodische Säure Schiff (PAS) Technik gefärbt. Mit Hilfe of this Methoden Erscheinen Soor Hyphen und Hefen Entweder dunkelblau (Gram-Färbung) oder rot / violett (PAS) [19].

Bei chronischen hyperplastischen Candidose, Eine Biopsie der Läsion ist für sterben anschließende Detektion von eindringenden Notwendig Candida Durch Die Histologische Färbung Entweder das PAS oder Gömöri der Methenamin Silberfärbung used Wird. Der Nachweis der Pilz-Elemente Innerhalb von Geweben Geschieht Wie sie tief Durch this Flecken gefärbt Sind. Das Vorliegen von Blastosporen und Hyphen oder Pseudohyphen Kann sterben histopathologist ermöglichen den Pilz als ArTeN zu identifizieren, Candida und anwesenheit von Die Anderen histopathologischen Merkmale gegeben, stellen Eine Diagnose chronischer hyperplastischen Candidose [20].

7. Laborkultur

7.1. Tupfer

Ein Tupfer Eines läsionaler Seite ist ein Relativ einfaches Elle Verfahren zum Nachweis von Wachstum und semi-quantitative Schatzung der Candida erhalten Werden. Die Sampling-Ansatz Beinhaltet Reiben Vorsichtig mit Einem sterilen Wattestäbchen über das läsionaler Gewebe und anschließend Eine Primäre Isolationsmedium Wie Sabouraud-Dextrose-Agar (SDA) [21] Inokulation.

7.2. Konzentrierte Mundspülung

Die Mundspülung Technik Beinhaltet sterben Patienten 10 Hält&# X02009; ml steriler Phosphat-gepufferter Salzlösung (0,01&# X02009; M, pH-Wert&# X02009; 7.2) in den Mund für 1 Minute. Die Lösung Wird Dann Konzentriert (10-fach) Durch Zentrifugation und Einems Bekannten Volumen, in der Regel 50&# X02009;&# X003bc; L, beimpft Auf einem Agarmedium Eine Spirale Plattieren-System. nach 24&# X02013; 48&# X02009; h Inkubation bei 37&# X000b0; C, das Wachstum WIRD DURCH Zählung von Kolonien bewertet und als Soor koloniebildenden Einheiten pro ml (KBE&# X02009; ml &# X02212; 1) von Rinse [16].

7.3. Impressum Kultur

Der Abdruck Elle Verfahren used Eine sterile Schaumstoffpolster Bekannter Größe (in der Regel 2,5&# X02009; cm 2), sterben zuvor in Einem geeigneten flüssigen Medium eingetaucht, Wie Sabouraud-Brühe, unmittelbar vor der verwendung. Das Kissen Wird Dann für 30 auf der Zielseite (Schleimhaut oder intraoralen Prothèse) platziert&# X02009; Sekunden und Dann zu Einems Agar für Kultur übertragen [16].

8. Kultur Medien

Die am häufigsten verwendeten primären Isolationsmedium für Candida SDA ist [22], sterben Zwar ermöglicht Wachstum von Candida. unterdrückt das Wachstum Vieler ArTeN von oralen Bakterien aufgrund Wadenfänger niedrigen pH-Wert. Der Einbau von Antibiotika in SDA weiter erhöhen Wird seine Selektivität [8]. Typischerweise Wird SDA aerob bei 37 inkubiert&# X000b0; C für 24&# X02013; 48&# X02009; Std. Candida Entwickelt als Creme, glatte, pastöse konvexe Kolonien auf SDA und Differenzierung Zwischen den ArTeN ist selten Möglich, [17] sterben. Es wird geschätzt, that Mehr als ein Candida Spezies Tritt in ungefähr 10% der oralen Proben und in den Letzten jahren sterben fähigkeit nonalbicans Spezies zu detektieren immer Wichtiger geworden [16].

In den Letzten JAHREN HABEN andere Differentielle Medien Entwickelt, sterben IDENTIFIZIERUNG bestimmter ermöglichen Candida Spezies basierend auf Kolonie AUSSEHEN und sterben Farbe nach der primären Kultur. Der vorteil derartiger Medien ist in that the Vorhandensein von mehreren Candida Spezies in Einer einzigen Infektion Kann Bestimmt Werden, Welche bei der Auswahl der nachfolgenden Behandlungsmöglichkeiten wichtig sein Kann [8]. Examples hierfür Sind Pagano-Levin-Agar oder im Handel Erhältliche chromogene Nährboden, nämlich CHROMagar Candida. Albicans ID, Fluroplate oder Candichrom albicans [16].

Pagano-Levin-Agar unterscheidet between Candida Spezies basierend auf Reduktion von Triphenyltetrazoliumchlorid. Das Medium Erzeugt schwach gefärbte Kolonien C. albicans. während Kolonien Anderer Candida Spezies zeigen Grade rosa Färbung Variiert. Pagano-Levin-Agar Hut Eine Ähnliche empfindlichkeit Gegenüber SDA Aber überlegen ist für den Nachweis von mehr als Einer Spezies in der Probe [23], CHROMagar Candida identifiziert C. albicans, C. tropicalis, und C. krusei basierend auf Kolonie Farbe und AUSSEHEN [24], während Albicans ID und Fluroplate HABEN vorteilhaft erwiesen, sterben, ideal präsumtiven IDENTIFIZIERUNG von C. albicans [25]. Die Spezifität der IDENTIFIZIERUNG Wird berichtet, 95% Werden für CHROMagar Candida [26] und 98,6% für Albicans ID und Fluroplate Nährboden [25]. Die verwendung von CHROMagar Candida als Eine Primäre Isolation Agar Wurde als Ansatz genannt, sterben Diskriminierung der neu beschriebenen Erlaubt C. dubliniensis [27] aus C. albicans. auf CHROMagar Candida. C. dubliniensis Berichten zufolge Entwickelt Sich als dunkler grüne Kolonien im Vergleich zu Denen von C. albicans [28]. Allerdings Unterscheidung between Diesen Beiden ArTeN CHROMagar verwendung Erscheint auf Subkultur und Speicherung von Isolaten zu sinken. Fehler des C. dubliniensis auf Agar-Medien bei der Inkubationstemperatur von 45 wachsen erhöhten&# X000b0; C Wurde vor Kurzem als Eine alternative Test vorgeschlagen Worden, between Diesen Beiden ArTeN [29] zu unterscheiden.

9. IDENTIFIZIERUNG von Candida spezies

IDENTIFIZIERUNG von Hefen auf Primärkulturmedien basieren, Infos finden traditionell auf morphologischen (Tabelle 5) und physiologischen Eigenschaften der Isolate Basis Durch Eine vielzahl von zusätzlichen Tests bestatigt Werden.

9.1. morphologischer kriterien

Der Keimschlauch Test ist sterben Standard Laborverfahren zur IDENTIFIZIERUNG C. albicans. Der Test-Beinhaltet sterben Induktions von Hyphen Auswüchsen (Keimschläuche), ideal in Pferdeserum bei 37 subkultiviert&# X000b0; C für 2&# X02013; 4&# X02009; Stunden. ETWA 95% C. albicans Isolieren Produzieren Keimschläuche, Auch Eine Eigenschaft, geteilt Durch C. stellatoidea und C. dubliniensis [16].

C. albicans und C. dubliniensis Kann Auch aus other Spezies aufgrund ihrer fähigkeit morphologischen Eigenschaften herzustellen, Wie Chlamydosporen Bekannt Sind, identifiziert Werden. Chlamydosporen Sind Refraktil, kugelförmige Strukturen eine den Enden der Hyphen following Kultur der Isolate Auf einem nährstoffarmen Medium, Wie zB Agar-Maismehl Erzeugt. Isolaten Sind in Einems Gittermuster Auf dem Agar inokuliert und überlagert mit Einems sterilen Deckgläschen. Nährboden Werden inkubiert für 24&# X02013; 48 Stunden bei 37&# X000b0; C und Dann mikroskopisch auf anwesenheit chlamydospore sucht [8].

9.2. Physiologische kriterien / Biochemische IDENTIFIZIERUNG

Biochemische IDENTIFIZIERUNG von Candida Spezies auf Kohlenhydratverwertung basiert weitgehend. Traditionelle Tests müssten beteiligt Kultur der Test-Auf einem Basalagar Isolaten Eine Kohlenstoffquelle fehlt. Kohlenhydratlösungen Würde Dann in Vertiefungen der beimpften Agar oder auf Filterpapierscheiben auf der Agar-OBERFLÄCHE gelegt Werden. Wachstum in der Nähe der Kohlenstoffquelle Würde Auslastung anzuzeigen. Kommerzielle Systeme basieren Auf dem same Prinzip, Aber-Test Kohlenhydrate Werden in Kunststoffvertiefungen angeordnet Auf einem Teststreifen untergebracht. Das Wachstum in Jeder Vertiefung Wird Durch Veränderungen in der Trübung oder Farbänderungen in bestimmten Kitsysteme lesen. Zahlencodes aus den Testergebnissen erhalten Werden used, um den Testorganismus zu identifizieren, basierend auf Datenbank-Vergleich [30].

9.3. Serologie

Serologische Tests Werden Häufig sterben klinische bedeutung zu ermitteln used Candida Spezies isoliert. Steigende Titer von IgG-Antikörpern gegen C. albicans Kann reflektieren invasive Candidiasis bei immunkompetenten Personen. Der Nachweis von IgA und IgM-Antikörpern ist wichtig, Eine akute Infektion zu identifizieren. Immunsupprimierten Individuen zeigen Häufig Variabilität in der Antikörperproduktion und in Einems Fall ist solchen verwendung Eines Antigen-Nachweistest sterben Wird empfohlen. Tests Wie Enzym Linked Immuno Assay (ELISA) und Radioimmunassay (RIA) für den Nachweis von Antigen candidial Entweder Zellwand-Mannan oder cytoplasmatische Bestandteile sind nun in den Ländern [31] zur verfügung entwickelten.

Die serologische Diagnose Wird oft verzögert und sterben Tests fehlen noch Sensitivität und Spezifität. Ferner ist sterben Antikörperproduktion in immunsupprimierten Patienten variabel, Wodurch erschwert sterben Diagnostizieren [32]. Dies ist aufgrund der tatsache, that Pilzantigene und Metaboliten oft schnell aus dem Kreislauf Entfernt Werden und das Vorhandensein von Antikörpern means nicht immer Candida Infektion, vor Allem bei Patienten mit Schweren Grunderkrankung oder Immunsuppressiva nehmen sterben [33].

Serologische Tests Sind in der Regel nicht ein Diagnostizieren-Werkzeug für Werkzeug Orale Candidose. Jedoch Konnen solche Tests Eine prognostische Instrument bei Patienten mit Schweren oralen Candidose sein, sterben schlecht auf antimykotische Therapie ansprechen [34].

9.4. Molecular-Based Identifikationsverfahren

IDENTIFIZIERUNG Durch Analyse der genetischen Variabilität ist ein stabiler Ansatz als Methoden, sterben auf phänotypische kriterien. Zur IDENTIFIZIERUNG von Candida basierend auf genetischer Variation Sind Analysen von elektrophoretische Karyotyp unterschiede und Länge Restriktionsfragmentpolymorphismen (RFLP) Gelelektrophorese oder DNA-DNA-Hybridisierung unter verwendung von [16].

Speziesspezifische PCR Ansätze gerechnet wurden Auch für used Candida Artbestimmung. Mehrere Zielgene gerechnet wurden berichtet für Candida Spezies Diskriminierung, obwohl sterben am häufigsten amplifiziert Sind Die Sequenzen des ribosomalen RNA-Operons. Identifikation Kanns følgende Gelelektrophorese Auflösung erhalten basierend auf PCR Produktgrößen erhalten Werden oder PCR Variation Produktsequenz Entweder Durch Direkte Sequenzierung oder Durch verwendung von Restriktionsfragmentanalyse følgende Schneiden von PCR-Sequenzen mit Restriktionsendonukleasen [8] sterben.

Fluoreszenz in situ Hybridisierung mit Peptid-Nukleinsäure-Methode (PNA Fish) ist Eine neue Detektionstechnik, sterben hochkonservierten artspezifische Sequenzen in der reichlich vorhandenen rRNA Lebens zielt C. albicans. Einzelne Zellen can direkt ohne sterben notwendigkeit Einer verstärkung [35] festgestellt Werden. This Technik erreicht Eine empfindlichkeit von 98,7&# X02013; 100%, bei Einer Spezifität von 100%, so that for the Unterscheidung C. albicans von der phänotypisch ähnlich C. dubliniensis [36].

Molekulare basierte Technologie Kann Auch zur IDENTIFIZIERUNG von Stammen used Werden, Candida Spezies, obwohl verwendung von Techniken Wie Pulsfeldgelelektrophorese (PFGE), RAPD-DNA (RAPD) Analyse und wiederholen Sie sterben PCR-Sequenz-Amplifikation (REP) für Epidemiologische Untersuchungen weitgehend reserviert in der Forschung der oralen Candidose [8] sterben.

10. Fazit

In den Letzten JAHREN Eine stärkere Betonung Wurde für Eine Zuverlässige IDENTIFIZIERUNG gegeben Candida Spezies aus humanen Klinischen Proben. Eine Schematische Darstellung für Soor Isolierung und IDENTIFIZIERUNG ist in Abbildung 1 dargestellt Seit Candida der residente Mikroflora, Werden geeignete Isolierungsmethoden erforderlich Wir, äh sterben anwesenheit in der Mündung zusammen mit ihrer Anzahl zu ermitteln. Es is also wichtig, sterben infizierenden Stämme zu identifizieren, Candida da Isolieren Candida Spezies Sind sehr Unterschiedlich, Sowohl in ihrer fähigkeit, Infektion und available in ihrer Anfälligkeit für Antimykotika verursachen. Verschiedene phänotypische Techniken Sind für Isolierte IDENTIFIZIERUNG Candida einschließlich der verwendung von morphologischen Kulturtests, Differential-Agar-Medien, und Biochemische Tests Assimilierung. This Elle Verfahren Sind mit den Jüngsten molekularen Techniken ergänzt weitgehend für Epidemiologische Untersuchungen vorbehalten.

Schematische Darstellung der Isolierung und IDENTIFIZIERUNG von Candida ArTeN aus der Mundhöhle.

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